紫外可見分光光度計(jì)的日常校準(zhǔn)與驗(yàn)證是確保數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性的關(guān)鍵，主要包括波長(zhǎng)校準(zhǔn)、吸光度校準(zhǔn)、基線校準(zhǔn)及性能驗(yàn)證，具體方法如下：
一、波長(zhǎng)校準(zhǔn)
使用標(biāo)準(zhǔn)燈：利用汞燈或氘燈的特征發(fā)射譜線（如汞燈的253.7nm、365nm）進(jìn)行校準(zhǔn)。將儀器設(shè)定在特定波長(zhǎng)，放置校準(zhǔn)燈，調(diào)整光路使其通過樣品池，觀察吸收峰并記錄實(shí)際波長(zhǎng)值，與標(biāo)準(zhǔn)波長(zhǎng)對(duì)比，偏差超通過儀器內(nèi)置功能或手動(dòng)調(diào)節(jié)光柵修正。
使用標(biāo)準(zhǔn)濾光片：采用Ho³?摻雜玻璃濾光片，掃描其特征吸收峰（如418nm、450nm），修正波長(zhǎng)示值。該方法無需復(fù)雜光源切換，但需定期更換濾光片（建議每年1次）。
二、吸光度校準(zhǔn)
透射比標(biāo)準(zhǔn)溶液法：
可見區(qū)：使用硫酸銅溶液（CuSO?·5H?O，λ=640nm，A=0.5）。
紫外區(qū)：使用重鉻酸鉀溶液（K?Cr?O?，λ=350nm，A=0.5）。
配制要求：使用分析純?cè)噭┡c一級(jí)容量瓶，溶液保質(zhì)期不超過7天。采用1cm石英比色皿，以空氣為參比，測(cè)量前需用參比液潤(rùn)洗樣品池3次。要求連續(xù)3次測(cè)量RSD≤0.3%，否則需重新裝液。
中性濾光片法：當(dāng)吸光度>1.5AU時(shí)，引入中性濾光片組合（如OD=0.5+1.0疊加），通過多點(diǎn)擬合修正Beer定律偏離。
三、基線校準(zhǔn)
使用空白溶劑（如蒸餾水）作為參比，測(cè)量其吸光度。調(diào)整儀器的基線調(diào)節(jié)裝置，使空白溶劑的吸光度值為零。重復(fù)測(cè)量幾次，確保基線穩(wěn)定。
四、性能驗(yàn)證
精度驗(yàn)證：準(zhǔn)備一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別測(cè)量每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度，計(jì)算其平均值和標(biāo)準(zhǔn)偏差，評(píng)估儀器的精度。
重復(fù)性驗(yàn)證：使用同一標(biāo)準(zhǔn)溶液，連續(xù)測(cè)量多次，計(jì)算每次測(cè)量的吸光度值，求其平均值和標(biāo)準(zhǔn)偏差，評(píng)估儀器的重復(fù)性。
線性驗(yàn)證：準(zhǔn)備一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別測(cè)量每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度，繪制吸光度-濃度曲線，計(jì)算曲線的線性相關(guān)系數(shù)，評(píng)估儀器的線性。
